吳茱萸為蕓香科植物、石虎或疏毛吳茱萸的干燥近成熟果實，氣芳香濃郁，味辛辣而苦，具有清熱止痛、降逆止嘔的功效，用于治療肝胃虛寒、陰濁上逆所致的頭痛或胃痛等癥狀，并能治療消化不良、濕疹、神經(jīng)性皮炎及口腔潰瘍等多種疾病，對心血管及免疫系統(tǒng)也具有一定的藥效。吳茱萸中含有揮發(fā)油、生物堿、檸檬苦素類、氨基酸類以及黃酮類等多種有效成分。吳茱萸揮發(fā)性成分是其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的一部分，具有抑菌殺菌、平喘、抑制麥角胺對α-受體的阻斷等作用，其中α-蒎烯對白色念珠菌具有明顯的抑菌和殺菌作用；檸檬烯具有抗腫瘤、抗炎癥、抗氧化、抗菌抑菌、祛痰平喘、利膽溶石等多種功效；羅勒烯不僅能提高植物對食草類昆蟲及某些病原菌的抗性，還對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌具有一定的抑制作用?，F(xiàn)有文獻(xiàn)多是對吳茱萸揮發(fā)性成分進(jìn)行分離鑒定，而缺少對其中主要成分含量的測定研究，導(dǎo)致吳茱萸質(zhì)量控制缺少保障。在吳茱萸揮發(fā)性成分分離鑒定的基礎(chǔ)上，筆者建立氣相色譜法對吳茱萸中羅勒烯、檸檬烯、α-蒎烯3種揮發(fā)性成分進(jìn)行含量測定，并通過聚類分析比較了4個產(chǎn)地9批吳茱萸藥材樣品中3種揮發(fā)性成分的含量差異，為吳茱萸的全面質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：7890B型，美國安捷倫科技有限公司。集熱式攪拌器：DF–101S型，金壇市科析儀器有限公司。調(diào)溫加熱套：DRT–TW型，鄭州科泰實驗設(shè)備有限公司。電子分析天平：TB–215D型，感量為0.01mg，丹佛儀器北京有限公司。α-蒎烯、檸檬烯、羅勒烯對照品：純度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）均大于95%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。乙酸乙酯：色譜純，批號為20160513，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。無水硫酸鈉：分析純，批號為11528044，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。吳茱萸：收集于不同產(chǎn)地，如江西、陜西、貴州、浙江等。實驗用水為純水。

1.2 溶液的制備

1.2.1 對照品溶液與混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

分別稱取α-蒎烯50mg、檸檬烯1500mg及羅勒烯250mg，置于同一50mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容，搖勻，得混合對照品儲備溶液。分別移取不同體積的混合對照品儲備溶液于一組10mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至標(biāo)線，搖勻，得到一系列不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，于4℃條件下保存，待測。

1.2.2 供試品溶液

按照2020版《中國藥典》（4部）中揮發(fā)油測定法（甲法）提取揮發(fā)油。稱取吳茱萸50g，置于2000mL圓底燒瓶中，加入10倍量水浸泡12h，揮發(fā)油提取器蒸餾水上部精密加入3mL乙酸乙酯，加熱保持微沸狀態(tài)6h，冷卻至室溫后，取乙酸乙酯層于10mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容，加入1g無水Na2SO4脫水，用微孔濾膜過濾，即得。

1.3 儀器工作條件

1.3.1 揮發(fā)油成分鑒定

（1）色譜條件。色譜柱：DB–5柱(30m×0.25mm×0.25μm，美國安捷倫科技有限公司)；升溫程序：0～2min保持溫度為60℃，2～29.5min以8℃/min的速率升至280℃，保持5min；進(jìn)樣口溫度：260℃；分流比：10∶1；載氣：氦氣，流量為1.2mL/min；進(jìn)樣體積：1μL。

（2）質(zhì)譜條件。離子源：EI源；掃描時間：3.5min；載氣：甲烷，流量為1.0mL/min；四級桿溫度：280℃；離子源溫度：300℃；質(zhì)量范圍：60～600Da。

1.3.2 3種揮發(fā)性成分含量測定

色譜柱：HP–5彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm，0.25μm，美國安捷倫科技有限公司)；檢測器：FID；升溫程序：0～5min，保持60℃，5～15min，以4℃/min的速率升至100℃；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測器溫度：310℃；分流比：20∶1；載氣：高純氮氣，流量為1mL/min；尾吹氣流量：45mL/min；進(jìn)樣體積：1μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取方法選擇

揮發(fā)油的提取方法有水蒸氣蒸餾法（SD）、索氏提取法（SE)、超臨界流體萃取法（SFE)、微波輔助萃取法（MAE)等。水蒸氣蒸餾法具有操作簡單、裝置簡易、提取率高等優(yōu)點，是一種提取揮發(fā)油的常用方法。2020版《中國藥典》通則中收載了兩種測定方法，甲法適用于測定相對密度小于1.0的揮發(fā)油；乙法適用于測定相對密度大于1.0的揮發(fā)油。吳茱萸揮發(fā)油相對密度在1.0以下，因此選擇水蒸氣蒸餾法提取吳茱萸藥材中的揮發(fā)油，為完善吳茱萸藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

2.2 揮發(fā)油成分鑒定

取適量供試品溶液，按照1.3.1氣相色譜–質(zhì)譜（GC–MS）條件進(jìn)樣測定，通過NIST標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索進(jìn)一步確認(rèn)化合物，吳茱萸揮發(fā)油共鑒定出33種化合物，主要為萜類、烯醇類、酯類等物質(zhì)，其中含量較高的物質(zhì)為α-蒎烯、檸檬烯、羅勒烯、水芹醛、丁香酚、4-異丙基苯甲醇、石竹烯、芳樟醇、五烯酸。吳茱萸揮發(fā)油中化學(xué)成分GC–MS法分析結(jié)果見表1所示。

相關(guān)鏈接：吳茱萸，芳樟醇，檸檬烯，乙酸乙酯

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