水體中的氨氮、亞硝酸鹽氮是水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境的主要有毒物質(zhì)，亞硝酸鹽氮能把血液中的血紅蛋白氧化為高鐵血紅蛋白，使之失去與氧結(jié)合的能力。亞硝酸鹽氮也是養(yǎng)殖水體主要的監(jiān)測對象。當(dāng)水體受到生活污水、養(yǎng)殖廢水、飼料生產(chǎn)與肉類加工等工業(yè)廢水中含氮有機(jī)物污染后，在水體中產(chǎn)生氨氮、亞硝酸鹽氮、硝酸鹽氮，亞硝酸鹽氮作為水中氮循環(huán)的中間產(chǎn)物，是水環(huán)境監(jiān)測的重要指標(biāo)。

亞硝酸鹽氮的測定方法有離子色譜法、氣相分子吸收法、分光光度法。離子色譜法和氣相分子吸收法簡便、快速、準(zhǔn)確、干擾較少，適用于環(huán)境水樣的測定，但因需要使用專用儀器，且儀器昂貴，不利于一般實(shí)驗(yàn)室和基層檢測單位的普及。在亞硝酸鹽氮的測定方法中，分光光度法因其方法靈敏、選擇性強(qiáng)、儀器較易獲得、準(zhǔn)確性良好而被實(shí)驗(yàn)室廣泛采用，其方法原理：在磷酸介質(zhì)中，亞硝酸鹽氮與對氨基苯磺酰胺反應(yīng)，生成重氮鹽，再與N-（1-萘基）-乙二胺偶聯(lián)生成紅色染料，在540nm波長處有最大吸收。但是該國標(biāo)法的測定上限僅為0.2mg／L，對于亞硝酸鹽氮含量較高的水樣則需稀釋一定倍數(shù)甚至數(shù)次稀釋才能進(jìn)行測量，使測定過程更為繁瑣，增大了測定誤差，降低了測定的準(zhǔn)確性。

為克服以上缺陷，本文將亞硝酸鹽氮顯色劑中的磷酸溶液改成鹽酸溶液，將重氮試劑濃度提高到原國標(biāo)法的3倍，研究該方法對亞硝酸鹽氮檢出上限以及靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度的影響，取各類含亞硝酸鹽氮污水進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，并研究干擾因素對改進(jìn)法測定的影響。

一、實(shí)驗(yàn)部分

1、主要儀器

UVmini-1240紫外-可見光分光光度計(jì)（NichipetEX可調(diào)式移液器，日本）；電子天平。

2、試劑及溶液配制

國標(biāo)法所用試劑、溶液等配制方法參考《水和廢水監(jiān)測分析方法》：吸取亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)中間液（50mg／L）10mL于100mL容量瓶中，用水定容至標(biāo)線，得到亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液1（5mg／L）；吸取國標(biāo)法中亞硝酸鹽氮中間液（50mg／L）10mL于1000mL容量瓶中，用水定容至標(biāo)線，得到亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液2（0.5mg／L）。

改進(jìn)法試劑、溶液的配制方法：取20mL濃鹽酸（37.5％）溶解于180mL蒸餾水中，得體積比為1∶9的鹽酸溶液；取15g對氨基苯磺酰胺溶解于150mL體積比為1∶9的鹽酸溶液，得到混合液；在混合液中加入0.5g鹽酸萘乙二胺，混勻并添加蒸餾水定容至250mL，得到改進(jìn)法的亞硝酸鹽氮顯色劑。

3、實(shí)驗(yàn)方法

（1）國標(biāo)法亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按照國標(biāo)法步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，獲得校正吸光度后，記錄數(shù)據(jù)，用最小二乘法繪制出以亞硝酸鹽氮濃度對校正吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出國標(biāo)法校準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)。

（2）改進(jìn)法亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

根據(jù)鄧勃的分析，在標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制過程中增加實(shí)驗(yàn)點(diǎn)數(shù)，可提高標(biāo)準(zhǔn)曲線的整體穩(wěn)定性，校正曲線中央的精密度優(yōu)于校正曲線兩端的精密度，故此實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，從原國標(biāo)法中的6個(gè)點(diǎn)增加到9個(gè)點(diǎn)，并將實(shí)驗(yàn)點(diǎn)集中于校準(zhǔn)曲線的中央部分，具體操作如下：①向具塞比色管中分別移人0、0.5、1、2、3、4、5、6、7mL亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液1（5mg／L）于9支具塞比色管中，用去離子水稀釋定容至50mL，對應(yīng)濃度分別為0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mg／L；②向各比色管加入改良亞硝酸鹽氮顯色劑1mL，混勻，加塞靜置15min后測定，2h內(nèi)有效；③于分光光度計(jì)540nm波長處，用光程10mm的比色皿，以去離子水為參比，測定各濃度亞硝酸鹽氮溶液的吸光度，從測得的吸光度，減去零濃度空白比色管的吸光度后，獲得各濃度的校正吸光度；④記錄數(shù)據(jù)，用最小二乘法繪制以亞硝酸鹽氮濃度對校正吸光度的校準(zhǔn)曲線，得出改進(jìn)法校準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)。

（3）國標(biāo)法和改進(jìn)法測定水樣的比較

取一高濃度亞硝酸鹽氮水樣，分別用國標(biāo)法和改進(jìn)法對該水樣稀釋10倍、30倍、50倍、100倍、200倍進(jìn)行測定，得出相應(yīng)校正吸光度，計(jì)算各自亞硝酸鹽氮濃度，乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，得出不同稀釋倍數(shù)下國標(biāo)法、改進(jìn)法對同一水樣的測定結(jié)果，進(jìn)行對比分析。

（4）改進(jìn)法檢出限的測定

用改進(jìn)法對去離子水進(jìn)行20次空白測定，分析確定改進(jìn)法對亞硝酸鹽氮測定的檢出限。

（5）改進(jìn)法檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度、精密度

對已知濃度的亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行6次重復(fù)測定，計(jì)算平均值、相對誤差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

（6）改進(jìn)法加標(biāo)回收率

按改進(jìn)法對各污水水樣進(jìn)行測定，并同時(shí)分別加入一定量的亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液做回收實(shí)驗(yàn)。

（7）改進(jìn)法干擾實(shí)驗(yàn)

國標(biāo)法中測定亞硝酸鹽氮時(shí)，水中的硫代硫酸鹽、聚磷酸鈉、高鐵離子會(huì)對測定結(jié)果產(chǎn)生干擾。選用亞硝酸鹽氮的標(biāo)準(zhǔn)水樣，添加一定濃度梯度的硫代硫酸鈉、三聚磷酸鈉、高鐵酸鈉分別做干擾實(shí)驗(yàn)，檢驗(yàn)各影響因素對改進(jìn)法中的干擾影響。

二、結(jié)果與討論

1、國標(biāo)法亞硝酸鹽氦校準(zhǔn)曲線

按照國標(biāo)法步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，獲得校正吸光度后，記錄數(shù)據(jù)，用最小二乘法繪制出以亞硝酸鹽氮濃度對校正吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出國標(biāo)法校準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)，所得結(jié)果如圖1所示?？梢钥闯觯趤喯跛猁}氮為0～0.2mg／L的濃度范圍內(nèi)，亞硝酸鹽氮濃度與校正吸光度呈線性關(guān)系Y=3.1944x+0.007，相關(guān)系數(shù)為0.9995，靈敏度為3.1944。

2、改進(jìn)法亞硝酸鹽氮校準(zhǔn)曲線

根據(jù)鄧勃的分析，在標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制過程中增加實(shí)驗(yàn)點(diǎn)數(shù)，可提高標(biāo)準(zhǔn)曲線的整體穩(wěn)定性，校正曲線中央的精密度優(yōu)于校正曲線兩端的精密度，故此實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，從原國標(biāo)法中的6個(gè)點(diǎn)增加到9個(gè)點(diǎn)，并將實(shí)驗(yàn)點(diǎn)集中于校準(zhǔn)曲線的中央部分，具體操作如下：①向具塞比色管中分別移入0、0.5、1、2、3、4、5、6、7mL亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液1（5mg／L）于9支具塞比色管中，用去離子水稀釋定容至50mL，對應(yīng)濃度分別為0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mg／L；②向各比色管加入改良亞硝酸鹽氮顯色劑1mL，混勻，加塞靜置15min后測定，2h內(nèi)有效；③于分光光度計(jì)540nm波長處，用光程10mm的比色皿，以去離子水為參比，測定各濃度亞硝酸鹽氮溶液的吸光度，從測得的吸光度，減去零濃度空白比色管的吸光度后，獲得各濃度的校正吸光度；④記錄數(shù)據(jù)，用最小二乘法繪制以亞硝酸鹽氮濃度對校正吸光度的校準(zhǔn)曲線，得出改進(jìn)法校準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)繪制以亞硝酸鹽氮濃度為戈軸，以吸光度為Y軸的改進(jìn)法校準(zhǔn)曲線，如圖2所示。

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