（4）反應(yīng)溫度的影響

取H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)溶液6.00mL（反應(yīng)液濃度為CH₂O₂=1.2×10^-4mol/L），其他條件不變，僅改變反應(yīng)溫度，測定吸光度（圖3）。

試驗(yàn)表明，反應(yīng)在室溫下即可發(fā)生（30℃下ΔA=0.174），但升高溫度，褪色反應(yīng)加快。反應(yīng)速率受溫度的影響分三段：30～40℃直線下降；40～50℃趨于穩(wěn)定，表明H₂O₂完全反應(yīng)；50～60℃又緩慢下降，這是因?yàn)樗嵝原h(huán)境下高溫促使甲基紅與共存物乙醇發(fā)生了酯化反應(yīng)，導(dǎo)致溶液顏色變淺。故褪色反應(yīng)溫度設(shè)定為40℃。
 

（5）反應(yīng)時間的影響

取H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)溶液6.00mL（反應(yīng)液濃度為CH₂O₂=1.2×10^-4mol/L），其他條件不變，僅改變反應(yīng)時間，測定吸光度。結(jié)果表明：在0～60min內(nèi)，lnA與t有線性關(guān)系（圖3內(nèi)插圖），顯然H₂O₂催化褪色反應(yīng)為一級反應(yīng)，速率方程為：lnA=-0.5669-0.00817t（min），反應(yīng)速率為0.00817min-1，反應(yīng)60min后，吸光度基本達(dá)到恒定（圖4）。故確定反應(yīng)時間為60min。

三、工作曲線

取H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50、4.00、4.50、5.00、5.50、6.00、6.50、7.00、7.50mL配制標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度依次為0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、1.10、0.12、0.13、0.14、0.15mmol/L，按實(shí)驗(yàn)方法完成吸光度測定并繪制工作曲線（圖5）。H₂O₂濃度在0～0.15mmol/L范圍內(nèi)與ΔA呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：ΔA=0.003+2.628c（mmol/L），相關(guān)系數(shù)r=0.9967。按實(shí)驗(yàn)方法平行測定11次空白溶液得s=0.01，三倍的信噪比求得方法檢測限為0.01mmol/L。

四、干擾實(shí)驗(yàn)

當(dāng)H₂O₂濃度為0.1mmol/L時，設(shè)定相對誤差不大于5%，除強(qiáng)氧化劑MnO₄^-、Cr₂O₇^2-有干擾之外，10倍的NH₄⁺、Zn²⁺、Ca²⁺、Mg²⁺、Al³⁺、Cu²⁺、CO₃^2-、SO₃²-、HCO₃^-均不影響測定。

五、樣品分析實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取0.5g固體食品樣品，于15mL離心管中，加入5mL乙腈/水（1∶1，v∶v）溶液，渦旋混勻，超聲提取20min，9500r/min離心10min，保留上層清液。

3%醫(yī)用過氧化氫消毒液稀釋1000倍。

取雨水、合成水樣、消毒液稀釋液、腐竹和銀耳處理液各5.00mL，按試驗(yàn)方法測定過氧化氫，平行六次，計算平均值，并完成加標(biāo)回收試驗(yàn)（表1）。精密度檢驗(yàn)RSD=4.84%～5.00%，符合光分析要求，加標(biāo)回收率在95.40%～103.5%范圍內(nèi)，說明共存物質(zhì)不影響過氧化氫測定。

分別采用光度法和碘量法對消毒液過氧化氫含量測定，計算原樣品百分含量和標(biāo)準(zhǔn)偏差S（表2）。完成兩種方法的顯著性檢驗(yàn)（t檢驗(yàn)）。

由兩種方法標(biāo)準(zhǔn)偏差S求得合并標(biāo)準(zhǔn)偏差Sc=0.7034g/L，t=0.0739，查表得t_0.05，₁₀=2.228，即t＜t_0.05，₁₀，故兩種分析結(jié)果的均值無顯著性差異。由上述檢驗(yàn)說明方法的精密度較高，系統(tǒng)誤差小，因此甲基紅褪色光度法可代替碘量法用于消毒液過氧化氫分析。
 

六、結(jié)論

Fe（Ⅲ）-MR催化氧化褪色光度法測定H₂O₂，干擾少，準(zhǔn)確度高；在甲基紅最大吸收波長處，H₂O₂濃度與吸光度變化值有線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r＞0.99。方法用于銀耳、腐竹、雨水及消毒液H₂O₂分析，結(jié)果滿意。

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