北方偉業(yè)計(jì)量集團(tuán)有限公司
| 培養(yǎng)基 | 酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃) |
| 傳代方法 | 1.溶解： 收到質(zhì)粒干粉后，請(qǐng)加入 20μl 無菌水至管底，溶解質(zhì)粒，室溫靜置 1min； 2.混合（吸附質(zhì)粒）： 200μl 感受態(tài)細(xì)胞 + 質(zhì)粒 DNA 5~10µl 混勻，冰上放置 30min； 3.熱激導(dǎo)入： 42℃靜置 90s； 4.收縮膜孔： 冰浴 2min； 5.修復(fù)培養(yǎng)： 毎管加 800µl LB 液體培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng) 1h 150 r/min； 6.篩選培養(yǎng)： 將適當(dāng)體積（100 µl）的復(fù)蘇細(xì)胞，涂布在相應(yīng)抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（瓊脂面務(wù)必干燥后）， 倒置培養(yǎng) 12-16h，出現(xiàn)菌落。 7.提?。? 挑取單克隆菌落至相應(yīng)抗性 LB 液體培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng) 12-16h，根據(jù)試驗(yàn)需要提取質(zhì)粒。 |
| 生長(zhǎng)條件 | LB+氨芐青霉素，37℃，克隆菌株BL21(DE3) |
| 存儲(chǔ)條件 | 2-8℃ |
| 安全等級(jí) | 1 |
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 質(zhì)粒載體 |
| 共享方式 | 公益性共享 |
pVAX1
(pVAX1)
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pCMV-HA-Ub
(pCMV-HA-Ub)
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(Escherichia coli Stbl3（LentiCRISPR V2）)
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(Escherichia coli DH5ɑ（pLVX-IRES-puro）)
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(Escherichia coli DH5α（pCDNA3.1+）)
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