2、提取時間的考察

參考國標GB5009：28-2016一般性食品中樣品提取時間，本試驗對不同類別的糕點進行加標試驗來考察樣品提取時間對目標成分提取效率的影響，考察的提取時間分別為5min、10min、20min、30min、40min、50min、60min，稱取糕點、月餅、辣條樣品各3份，精密加入混合標準使用液2.0mL，上機測定，得到4組分在不同提取時間的含量，結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，超聲提取10min，4種目標組分的數(shù)值基本達到穩(wěn)定，提取時間為20min所得含量最高，本次試驗最終選擇超聲時間為20min。
 

3、蛋白沉淀劑加入量的考察

參考相關文獻，本次試驗考察蛋白沉淀劑(亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液)加入量對不同類別糕點在4組分中的影響，蛋白沉淀劑加入量分別為0mL、lmL、2mL、3mL、5mL，再沉淀1mL，因找不到同時含有這4組分的陽性樣品，故試驗采用的是陰性樣品加標試驗進行考察，稱取糕點、月餅、辣條樣品各3份，精密加入混合標準使用液2.0mL，按樣品(無奶油蛋糕或面包、辣條、月餅)2g于50mL具塞離心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超聲20min，冷卻至室溫，加219g/L亞鐵氰化鉀、106g/L乙酸鋅溶液各2mL，渦旋混勻，于10000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，殘渣再提取一次，合并2次濾液，定容至刻度。

取15mL提取液，加10mL正己烷，渦旋5min，離心后，吸取下層過濾上機分析制備供試品溶液，上機測定，計算4組分在不同蛋白沉淀劑加入量所得含量，從表中可以看出，沉淀劑加入量對月餅影響最大，對辣條影響次之，對糕點影響最小，沉淀劑以加入各2mL為宜，對于加入沉淀劑后的提取液還渾濁的樣品，可以在提取液中再加入各lmL沉淀劑，不會對結(jié)果造成顯著差異。

4、凈化方式的考察

（1）正己烷凈化方式的考察

本次試驗采用正己烷萃取1次、正己烷萃取2次、PRiMeI-ILBSPE柱三種凈化方式對不同類別糕點4組分加標含量測定結(jié)果的影響，蛋白沉淀劑(亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液)加入量對不同類別糕點在4組分中的影響，蛋白沉淀劑加入量分別為0mL、lmL、2mL、3mL、5mL，再沉淀1mL，因找不到同時含有這4組分的陽性樣品，故試驗采用的是陰性樣品加標試驗進行考察，稱取糕點、月餅、辣條樣品各3份，精密加入混合標準使用液2.0mL，按樣品(無奶油蛋糕或面包、辣條、月餅)2g于50mL具塞離心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超聲20min，冷卻至室溫，加219g/L亞鐵氰化鉀、106g/L乙酸鋅溶液各2mL，渦旋混勻，于10000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，殘渣再提取一次，合并2次濾液，定容至刻度。

取15mL提取液，加10mL正己烷，渦旋5min，離心后，吸取下層過濾上機分析制備供試品溶液，上機測定，計算4組分在不同蛋白沉淀劑加入量所得含量，從表中可以看出，沉淀劑加入量對月餅影響最大，對辣條影響次之，對糕點影響最小，沉淀劑以加入各2mL為宜，對于加入沉淀劑后的提取液還渾濁的樣品，可以在提取液中再加入各lmL沉淀劑，不會對結(jié)果造成顯著差異。上機測定，結(jié)果見圖2，對大部分樣品而言，正己烷萃取1次可降低樣品基質(zhì)效應，使樣品檢出含量變大，正己烷萃取2次，則會帶走目標物質(zhì)，PRiMeHLB小柱，對目標組分存在吸附，試驗最終選擇正己烷提取1次。

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