2.結(jié)果與分析

2.1產(chǎn)α-L-鼠李糖苷酶海洋細(xì)菌的篩選與鑒定

2.1.1產(chǎn)α-L-鼠李糖苷酶菌株的篩選

將富集培養(yǎng)的泥樣梯度稀釋后，涂布于添加柚皮苷的篩選培養(yǎng)基，30℃倒置培養(yǎng)，每天觀察長(zhǎng)出的菌落形態(tài)及透明圈出現(xiàn)情況。挑取初篩出現(xiàn)透明圈的菌落，分離純化后挑取單菌落點(diǎn)樣至篩選平板。篩選平板分四塊區(qū)域點(diǎn)樣后放入30℃培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)，7d后獲得1株有明顯透明圈菌株，如圖1。將該菌株命名為DTC03。

2.1.2菌株DTC03的形態(tài)學(xué)特征

觀察平板中的菌落形態(tài)，其菌落呈白色，不透明，邊緣不規(guī)則，表面粗糙的半球狀菌落(圖2a)。革蘭氏染色后發(fā)現(xiàn)菌株DTC03為長(zhǎng)桿狀的革蘭氏陽(yáng)性菌(圖2b)。芽孢染色表明該菌株DTC03可以產(chǎn)生芽孢(圖2c)。根據(jù)菌落形態(tài)，菌體形態(tài)，初步判定菌株DTC03屬于芽孢桿菌屬。

2.1.3菌株DTC03的生理生化特征

菌株DTC03明膠液化試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、葡萄糖、甘露醇試驗(yàn)均呈陽(yáng)性，甲基紅試驗(yàn)為陰性(表1)。

2.1.4菌株DTC03的16SrDNA擴(kuò)增及分析

將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送到南京思普金生物科技有限公司測(cè)序，測(cè)得菌株DTC03的16SrDNA的序列為1392bp。將序列與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示該菌株DTC03的16SrDNA序列與貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)的16SrDNA序列相似度達(dá)99.93%。選擇與其親緣關(guān)系較近的菌株進(jìn)行比對(duì)，并使用MEGA7構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果如圖3所示，該菌是芽孢菌屬，且與Bacillusvelezensis同源相似性最高。結(jié)合形態(tài)和生理生化特征，將鑒定菌株DTC03為Bacillusvelezensis。目前國(guó)內(nèi)外尚未有Bacillusvelezensis產(chǎn)α-L-鼠李糖苷酶的相關(guān)報(bào)道。

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