隨著人們生活水平的不斷提高，農(nóng)產(chǎn)品安全成為人們關(guān)注的重點(diǎn)，洋蔥味甘微辛辣，具有抗炎抑菌、降低血壓血脂等功效，含有多種維生素、前列腺素A、黃酮等物質(zhì)，被譽(yù)為“蔬菜皇后”。但是不科學(xué)、不合理的農(nóng)藥使用將會(huì)導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)殘超標(biāo)，帶來(lái)食品安全隱患，嚴(yán)重威脅人們的身體健康，國(guó)家也對(duì)食品中農(nóng)藥最大殘留限量做出相關(guān)規(guī)定。我國(guó)是洋蔥的生產(chǎn)和出口大國(guó)，洋蔥年產(chǎn)量約2400萬(wàn)噸。因此，開(kāi)展洋蔥農(nóng)藥殘留檢測(cè)具有重要意義。

由于洋蔥內(nèi)含蒜氨酸酶和多種硫化物，在洋蔥農(nóng)殘檢測(cè)樣品制備過(guò)程中，攪碎樣品使細(xì)胞腔室內(nèi)的蒜氨酸酶被釋放，在10s內(nèi)就會(huì)將蒜氨酸轉(zhuǎn)化為大蒜素，大蒜素不穩(wěn)定，可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為二烯丙基二硫醚、大蒜新素等物質(zhì)，在高溫下發(fā)生Cope消除反應(yīng)，可分解為更加復(fù)雜多樣的含硫化合物，這些物質(zhì)和有機(jī)磷農(nóng)藥有類似的化學(xué)性質(zhì)，在進(jìn)氣相色譜分析時(shí)，有很強(qiáng)的響應(yīng)，產(chǎn)生假陽(yáng)性，干擾農(nóng)殘檢測(cè)，是農(nóng)殘分析中最難分析的樣品之一。因此，如何抑制蒜氨酸酶活性，減少含硫化合物的產(chǎn)生與分解，是解決洋蔥農(nóng)殘檢測(cè)的關(guān)鍵。目前辛辣食物農(nóng)殘檢測(cè)去除干擾的方法有磷酸酸化法、分子印跡固相萃取法、凝膠凈化法、微波熱處理法、攪拌棒萃取法等，這些方法有的存在樣品前處理過(guò)于復(fù)雜、有的成本較高、有的農(nóng)殘回收率較低。本研究結(jié)合蒜氨酸酶活性中心，通過(guò)Cu2+對(duì)蒜氨酸酶輔助因子5’-磷酸吡哆醛結(jié)構(gòu)以及其與蒜氨酸酶主鏈結(jié)合的影響，從而抑制蒜氨酸酶的活性，解決了洋蔥農(nóng)殘檢測(cè)過(guò)程中硫化物的產(chǎn)生，消除了基質(zhì)干擾，同時(shí)結(jié)合固相萃取技術(shù)，建立了洋蔥中12中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)的分析方法，以期為洋蔥的監(jiān)管及安全把控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮洋蔥購(gòu)自保山本地農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。乙腈、丙酮(色譜純，美國(guó)Supelco公司)；甲苯、氯化鈉、硫酸銅(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；ProElutTPC固相萃取柱(500mg/6mL，填料：石墨化碳：氨丙基：Florisil土為1:1:1，天津迪馬科技有限公司)。敵敵畏、甲胺磷、樂(lè)果、毒死蜱、倍硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、對(duì)硫磷、喹硫磷、甲基硫環(huán)磷、硫環(huán)磷、三唑磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品[濃度均為100μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(天津)]。

1.2 儀器與設(shè)備

JA2003電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；Agilent7890A氣相色譜儀(配火焰光度檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫科技有限公司)；PE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置(上海亞榮生化儀器廠)；XW80A型微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；KQ500DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；JYL-C012E料理機(jī)(九陽(yáng)股份有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確移取敵敵畏、甲胺磷、樂(lè)果等12種有機(jī)磷類農(nóng)藥各0.50mL于25mL容量瓶，用丙酮配制成2.0μg/mL混合儲(chǔ)備液，然后逐級(jí)稀釋成濃度為0.02、0.05、0.10、0.15、0.20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.3.2 樣品制備

對(duì)照組1：取50.0g洋蔥，將其切碎，放入料理機(jī)中破碎，制成待測(cè)樣。

對(duì)照組2：將洋蔥冷凍后取50.0g樣品，快速將其切碎，放入料理機(jī)中破碎，制成待測(cè)樣。

實(shí)驗(yàn)組：取50.0g洋蔥，加入5%硫酸銅溶液10mL，與樣品一同破碎制成待測(cè)樣。

1.3.3 提取

取待測(cè)樣25.00g于100mL比色管中，加入50.0mL乙腈，渦旋1min，超聲提取20min后用濾紙過(guò)濾，濾液收集到裝有5g氯化鈉的100mL具塞量筒內(nèi)，劇烈振蕩1min，在室溫下靜置30min，使乙腈相和水相分層。

1.3.4 凈化

準(zhǔn)確移取10.00mL乙腈提取液于棕色雞心瓶中，50℃水浴下旋蒸至近干，加入2.0mL乙腈+甲苯(3:1，V:V)超聲溶解，獲得待凈化液。

將TPC固相萃取小柱用6.0mL乙腈+甲苯(3:1，V:V)條件化，待溶劑到達(dá)吸附層表面時(shí)，倒入待凈化液，洗脫液用雞心瓶接收。凈化液完全進(jìn)入固相萃取柱后，用8mL乙腈+甲苯(3:1，V:V)淋洗TPC柱。將洗脫液旋蒸近干，用2.0mL丙酮定容，超聲15s，過(guò)0.22μm濾膜后，供氣相色譜儀測(cè)定。

1.3.5 色譜條件

ZB-1701毛細(xì)管柱(30m×0.25mm，0.25μm)；進(jìn)樣口溫度：220℃；不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1.0μL；升溫程序：初溫：100℃保持2min，以15℃/min升到190℃，保持12min，以20℃/min升到250℃，保持5min；火焰光度檢測(cè)器(flamephotometricdetector，F(xiàn)PD)溫度：230℃；載氣及尾吹氣：高純氮?dú)?，純度?9.99%，載氣流量：1.0mL/min，尾吹流量：30mL/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 硫酸銅濃度的選擇

稱取約50.0g樣品4份，1份為空白對(duì)照，其余3份在攪碎前分別加入10mL濃度為2%、5%、8%硫酸銅溶液，以研究不同濃度硫酸銅溶液對(duì)蒜氨酸酶活性的抑制率。研究表明：未經(jīng)硫酸銅處理的空白樣有很多雜峰，集中在15min前出峰，響應(yīng)信號(hào)高，有些峰與敵敵畏、甲胺磷等保留時(shí)間相同(如圖1所示)；經(jīng)2%的硫酸銅溶液處理的樣品，色譜圖顯示雜峰明顯減少，但仍有干擾，說(shuō)明2%濃度的硫酸銅溶液對(duì)蒜氨酸酶活性抑制不完全；5%的硫酸銅溶液處理的樣品，基線穩(wěn)定，譜圖干凈，無(wú)雜峰干擾(如圖1所示)，8%濃度的硫酸銅溶液處理的樣品，色譜圖情況與5%濃度的硫酸銅溶液無(wú)差異，說(shuō)明5%濃度的硫酸銅溶液對(duì)蒜氨酸酶活性抑制已基本完全。因此，確定5%濃度的硫酸銅溶液為最佳濃度。

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