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重組漆酶降解黃曲霉毒素B1分子對(duì)接分析及產(chǎn)物結(jié)構(gòu)解析(三)

發(fā)布時(shí)間:2021-01-29 11:31 編輯者:周世紅

3、各因素對(duì)AFB1降解率的影響
b1

由圖5A可以看出,漆酶與AFB1孵育時(shí),當(dāng)孵育時(shí)間在12~24h內(nèi),降解率逐漸升高,時(shí)間大于24h,降解率趨于穩(wěn)定為90.33%;由圖5B可以看出,在25~30℃范圍內(nèi),AFB1降解率基本保持不變,在35℃達(dá)到為大值77.45%,當(dāng)溫度在35~40℃范圍內(nèi),降解率降低,當(dāng)溫度大于40℃時(shí),略微升高,與大多數(shù)真菌漆酶一樣,LAC3是一種相當(dāng)耐溫的酶,但是耐熱性是關(guān)于曝光時(shí)間的函數(shù),當(dāng)溫度高于40℃,該在此條件暴露12h后可能導(dǎo)致失活較快,活性降低;由圖5℃可以看出,在實(shí)驗(yàn)條件范圍內(nèi),毒素的降解率隨漆酶酶活力的增加而逐漸升高,當(dāng)酶活力達(dá)到3U時(shí),AFB1的降解率達(dá)到峰值74.87%,繼續(xù)加大酶量,降解率基本不在增長。

4、響應(yīng)面法優(yōu)化漆酶降解AFB1條件

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,選擇孵育時(shí)間(A)、孵育溫度(B)、酶活力(C),以AFB1的降解率(Y)為響應(yīng)值,其中-1、0、1分別代表低、中、高3個(gè)水平,試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表3。將數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行多元回歸分析,得到回歸方程:

Y=-504.54600+8.95888A+22.91040B+3.40289C--0.10758AB-0.00550AC-0.037775BC-0.16133A2-0.26762B2-0.012395C2

b2

b3

由表4可知,模型P值小于0.0001,表明該模型極顯著,失擬項(xiàng)P值大于0.05,表明失擬項(xiàng)驗(yàn)證不顯著,說明回歸方程可靠可以用于AFB1最高降解率條件的預(yù)測。A和B對(duì)AFB1的降解影響極顯著,A2和C2對(duì)AFB1的降解影響顯薯,表明孵育時(shí)間、孵育溫度和酶活力對(duì)AFB1的降解有顯著的影響,影響程度從大到小為孵育時(shí)間>孵育溫度>酶活力。

5、AFB1降解條件的響應(yīng)面分析

 

b4

b5

從圖6a可以看出,孵育溫度對(duì)應(yīng)的響應(yīng)值的曲線陡峭,表明對(duì)AFB1降解率影響較大,而孵育時(shí)間對(duì)應(yīng)的響應(yīng)值的曲線相對(duì)平緩,表明孵育時(shí)間對(duì)AFB1降解率的影響不大,孵育時(shí)間和孵育溫度的等高線扁平,表明孵育溫度和孵育時(shí)間的交互作用對(duì)AFB1降解率的影響較大;

從圖6b可以看出,酶活力對(duì)應(yīng)的響應(yīng)值的曲線陡峭,說明對(duì)AFB1的降解率影響較大,而孵育時(shí)間對(duì)應(yīng)的響應(yīng)值曲線相對(duì)平緩,表明孵育時(shí)間對(duì)AFB1降解率的影響不大,酶活力和孵育時(shí)間的等高線近似圓形,表明酶活力和孵育時(shí)間的交互作用對(duì)AFB1降解率的影響較??;從圖6c可以看出,酶活力對(duì)應(yīng)的響應(yīng)值曲線相對(duì)較陡,而孵育溫度對(duì)應(yīng)的響應(yīng)值曲線較平緩,表明酶活力對(duì)AFB1降解率影響較大,酶活力和孵育溫度的等高線扁平,表明酶活力和孵育溫度的交互作用對(duì)AFB1降解率的影響較大。

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