精油因其獨特的組成和良好的生物活性，在抗菌、醫(yī)藥及化妝品等領(lǐng)域有非常廣泛的應(yīng)用。

柏木油作為世界十大精油之一，市場需求量很大。柏木油取自柏木的木屑，然而柏木的成材需要經(jīng)歷一個較長的生長周期(大約為60年)，這無疑是限制柏木油產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵性因素。杉木油無論從香氣特征還是主要化學(xué)成分上來講都與柏木油類似，而且杉木具有快速生長的特點，
一般在20年以內(nèi)即可成材，因此杉木油完全可以替代部分柏木油在天然香料工業(yè)中的應(yīng)用。柏木油和杉木油的主要組分是。α-柏木烯、β-柏木烯、柏木醇和羅漢柏烯等。研究表明，柏木醇是杉木油具有抗菌、抗螨、抗蟻活性的主要成分之一。此外柏木醇還具有改善睡眠、緩解壓力和鎮(zhèn)靜的效果。柏木烯是某些合成香料的重要原料，其合成的香料，如甲基柏木酮、柏木酮、柏木烯醇和環(huán)氧柏木烷被廣泛應(yīng)用于日用化妝品、香水、香皂等領(lǐng)域。

近些年，學(xué)者們采用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC—MS)對杉木油的化學(xué)成分進行了鑒定和分析。目前，柏木烯和柏木醇的檢測定量方法普遍采用的是面積歸一化法，這種方法不僅不能準確定量而且會由于進樣量的較大誤差而導(dǎo)致較低的檢測準確性。為了準確定量且提高檢測準確性，本實驗研究了內(nèi)標法對柏木烯和柏木醇的定量分析。

一、材料與方法

1、實驗材料與儀器

α-柏木烯標準品(純度＞95.0％，批號BCBSl339V)、β-柏木烯標準品(純度＞95.0％，批號28622511V)和柏木醇標準品(純度＞99.0％，批號BCBTl642)：Sigma-Aldrich公司；反式-茴香烯標準品(純度為99％，批號C1728112)：Aladdin公司，作為內(nèi)標物使用；乙酸乙酯(色譜純)：SR公司。

GC-2010Plus氣相色譜儀和FID檢測器：Et本島津企業(yè)管理(中國)有限公司；HP-FFAP毛細管柱(30m×0.25mm×0.25μm)：美國安捷倫科技(中國)有限公司。

2、實驗方法

（1）標準溶液的制備

混標溶液：分別稱取0.3g左右α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇標準品于同一個25mL容量瓶中，用少量乙酸乙酯溶解后稀釋至刻度，搖勻待用。
內(nèi)標溶液：精密稱取1.0g茴香烯于100mL容量瓶中，用少量乙酸乙酯溶解后稀釋至刻度，搖勻待用。

（2）色譜條件

本實驗采用配備有FID檢測器的氣相色譜儀進行檢測分析。以高純氮氣為載氣，載氣流量為3.0mL／min；空氣流量、氫氣流量和尾吹流量分別為400mL／min、40mL／min和40mL／min；進樣口溫度為250℃，采用分流進樣，分流比為50:1，進樣量1μL；色譜柱初始溫度為70℃，保持5min，然后以8℃／min的速率升至210℃，保持11min；檢測器溫度為250℃。

3、內(nèi)標法檢測的驗證

（1）精密度的驗證

準確移取2mL混標溶液于10mL容量瓶中，加入2mL內(nèi)標溶液，然后用乙酸乙酯稀釋至刻度，充分混勻。在上述色譜條件下，對此溶液進行色譜分離，考察各目標峰的分離情況以及方法的精密度。精密度實驗內(nèi)容如下：日內(nèi)重復(fù)進樣檢測3次，日間檢測5天，以各個成分與內(nèi)標的響應(yīng)值情況為對象分析相對標準偏差(RSD)。響應(yīng)值按式(1)計算：

其中：f_i為α-柏木烯、β-柏木烯、柏木醇與內(nèi)標物茴香烯的響應(yīng)值(分別對應(yīng)于i=1、2和3)；A_i為檢測條件下α-柏木烯、β-柏木烯、柏木醇的峰面積；Ao為檢測條件下內(nèi)標的峰面積；C_i為α-柏木烯、β-柏木烯、柏木醇的濃度，mg/mL；Co為內(nèi)標物茴香烯的濃度，mg／mL。

（2）標準曲線及檢出限的測定

分別吸取2mL混標溶液于兩個10mL容量瓶中(分別記為l#和2樣瓶)，在2#瓶中加入2mL乙酸乙酯(此時1#瓶中標準溶液的濃度為2#瓶的2倍)，混勻后從中吸取2mL混合溶液至另一個10mL容量瓶(記為3#瓶)，在3#瓶中加入2mL乙酸乙酯(此時2#瓶中標準溶液的濃度為3#瓶的2倍)，按照上述方法進行5次梯度稀釋，共得到7個不同濃度的溶液，然后分別在不同梯度的標準溶液中加入2mL內(nèi)標溶液，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻待用。
根據(jù)S／N=3(即信號與噪聲平均功率的比值為3)計算檢出限。

（3）加標回收率的驗證

已知一個杉木油樣品中α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的質(zhì)量分數(shù)含量分別為32.37％、7.65％和10.26％，準確稱取一定量該樣品分別置于25mL和10mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，分別作為被加標樣品和加標溶液。分別準確移取被加標樣品4、3和2mL于10mL容量瓶中，各加入lmL加標溶液以及2mL內(nèi)標溶液，然后用乙酸乙酯稀釋至刻度，在實驗的色譜條件下計算加標回收率。

4、內(nèi)標法與面積歸一化法檢測結(jié)果的對比

選同一杉木油樣品，在實驗的色譜條件下進行檢測，分別用內(nèi)標法和面積歸一化法計算其α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的含量。內(nèi)標法和面積歸一化法計算公式分別見式(2)和式(3)。

式中：X_j為樣品溶液中α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的含量(分別對應(yīng)于i=1、2和3)，％；A_j為樣品溶液中α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的峰面積；A₁為樣品溶液中內(nèi)標的峰面積；α_j為α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇標準曲線的斜率；b_j為。α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇標準曲線的截距；C₁為樣品溶液的內(nèi)標濃度，mg／mL；D為樣品定容后的體積(也即樣品的稀釋倍數(shù))，mL；m為樣品的稱樣量，g。

式(3)中：X_j為樣品溶液中α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的含量(分別對應(yīng)于i=1、2和3)，％；A_j為樣品溶液中相應(yīng)組分的峰面積；A為將內(nèi)標和溶劑空白扣除后，樣品溶液中所有檢出峰面積的總和。

二、結(jié)果和討論

1、內(nèi)標法檢測的驗證分析

（1）峰的分離情況

圖1和圖2分別為標準溶液和樣品溶液中α-柏木烯、β-柏木烯、柏木醇與茴香烯的氣相色譜圖。

由圖可知，在本實驗建立的色譜條件下，內(nèi)標物茴香烯的峰不與目標成分α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的峰重疊，并且各目標成分的峰之間分離度較好。

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