北方偉業(yè)計量集團有限公司
農獸殘檢測方法—酶聯(lián)免疫吸附檢測技術-ELISA
基本原理:
使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。
在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。
用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。
加入酶反應的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據顏色反應的深淺進行定性或定量分析。
適用范圍:
ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。該法適于測定細胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本,干擾小,可以測到每毫升納克水平的細胞因子(或受體)的水平。
三種必要試劑:
1. 固相的抗原或抗體。
2. 酶標記的抗原或抗體。
3. 酶作用的底物。
紅外吸收光譜-IR
基本原理:
當用一束具有連續(xù)波長的紅外光照射物質時,該物質的分子就要吸收一定波長的紅外光能量,并將其轉變?yōu)榉肿拥恼駝幽芎娃D動能,從而引起分子振動-轉動能級躍遷。通過儀器記錄下不同波長的透光率(或吸光度)的變化曲線,即是該物質的紅外光譜。紅外吸收光譜也是一種分子吸收光譜。
紅外吸收光譜一般用T~曲線或T~波數(shù)曲線表示??v坐標為百分透射比T%,因而吸收峰向下,向上則為谷;橫坐標是波長(單位為µm ),或波數(shù)(單位為cm-1)。10000/波數(shù)=波長(um)
紅外光譜的特點:
優(yōu)點:1.應用廣,提供信息多且具有特征性。
2.不受物體的相態(tài)限制
3.樣品用量少,分析速度快,操作簡便
局限性:1.不能產生紅外吸收的物質無法測定
2.旋光異構體以及不同分子量的同一高聚物無法鑒別
3.譜圖上不是所有的峰都能作出理論解釋
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