隨著現(xiàn)代人們生活水平的不斷提高，健康意識(shí)也越來(lái)越強(qiáng)，但過(guò)快的生活節(jié)奏和較大的工作壓力，易使身體長(zhǎng)期處于精力不夠、失眠多夢(mèng)的亞健康狀態(tài)。因此，具有相應(yīng)調(diào)理作用、食用方便、副作用小、可長(zhǎng)期服用的保健食品，受到消費(fèi)者的青睞。其中，緩解疲勞類和改善睡眠類的保健食品較為暢銷，品種也較多。

然而，保健品行業(yè)過(guò)快、過(guò)熱發(fā)展，使市場(chǎng)出現(xiàn)不法商家為牟利在保健品食品中違禁添加大量、多種非法化學(xué)藥物成分的不法現(xiàn)象。由于產(chǎn)品標(biāo)簽中沒有標(biāo)明添加的藥物成分及劑量，消費(fèi)者在不知情的情況下攝入，易引起不良反應(yīng)，對(duì)健康造成嚴(yán)重危害，進(jìn)而影響保健食品行業(yè)良性發(fā)展。

目前，保健食品中添加違禁藥物的檢測(cè)方法較多，包括：分光光度法、薄層色譜法、高效液相色譜法、色譜-質(zhì)潛法等。由于保健食品的基質(zhì)較為復(fù)雜，這些檢測(cè)方法存在檢測(cè)組分單一、分離效果差、定性準(zhǔn)確度不夠、難以鑒別結(jié)構(gòu)相似物、檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)等問(wèn)題，無(wú)法滿足高通量檢測(cè)的需要。

而國(guó)家藥品監(jiān)督管理局的藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件巾緩解疲勞類和改善睡眠類保健品的檢測(cè)方法，能同時(shí)檢測(cè)的藥物種類較少，靈敏度低，定性定量繁瑣。因此，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)已無(wú)法有效地支撐目前市場(chǎng)監(jiān)管的要求，亟需一種針對(duì)性強(qiáng)、準(zhǔn)確高效、適用范圍廣的檢測(cè)方法。

三重四極桿復(fù)合離子阱質(zhì)譜（QTRAP）具有質(zhì)量范圍寬、掃描速度快、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。與傳統(tǒng)的三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）相比，在具有相同定量準(zhǔn)確性的同時(shí)，定性靈敏度要高出500倍，能提供目標(biāo)物質(zhì)的精確分子量以及它的多級(jí)質(zhì)譜碎片離子信息，形成信息庫(kù)，將質(zhì)最數(shù)十分接近的離子進(jìn)行有效分辨，還可以破解化合物結(jié)構(gòu)的信息，有著強(qiáng)大定性能力。

通過(guò)單次分析可對(duì)成百上下種痕量組分進(jìn)行定性、定量和確證。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)30種保健品中緩解疲勞類和改善睡眠類違禁添加藥物，建立了高效液相色譜-三重嗎極桿復(fù)合離子阱質(zhì)譜（HPLC-QTRAP）法快速檢測(cè)法。本方法通量大、操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、準(zhǔn)確性強(qiáng)，旨在提高違禁添加藥物的檢驗(yàn)效率和定性準(zhǔn)確度，為新形勢(shì)下的保健食品臨管提供有效的技術(shù)支持。

1材料與方法

1.1材料與儀器

50批次緩解疲勞類和改善睡眠類保健品均來(lái)源于為市場(chǎng)監(jiān)督抽檢任務(wù)，抽檢范同為南京市流通領(lǐng)域的藥店、超市和商場(chǎng)；乙酸銨分析純98％；甲醇和乙腈色譜純美國(guó)MERCK公司；超純水；標(biāo)準(zhǔn)品：地西泮（批號(hào)171225-201304，純度99.9％）；硝西泮（批號(hào)171217-201403，純度99.9％）；氯硝西泮（批號(hào)171227-201404，純度99.7％）；氯氮卓（批號(hào)171248-200702，純度99.4％）；奧沙西泮（批號(hào)171229-200603，純度99.6％）；馬來(lái)酸咪噠唑侖（批號(hào)171250-20040l，純度99.5％）；勞拉西泮（批號(hào)171253-201102，純度99.8％）；艾司嘩侖（批號(hào)171219—201604，純度99.9％）；阿普唑侖（批號(hào)171218-201305，純度99.5％）；巴比妥（批號(hào)171220-200602，純度99.5％）；苯巴比妥（批號(hào)171222-201206，純度99.7％）；異戊巴比妥（批號(hào)171221-201203，純度99.9％）：司可巴比妥鈉（批號(hào)171223-200402，純度99.4％）；氯美扎酮（批號(hào)100408-200401，純度99.6％）；佐匹克隆（批號(hào)100870-200801，純度99.5％）；馬來(lái)酸氯苯那敏（批號(hào)100047-201507，純度99.7％）；青藤堿（批號(hào)110774-201808，純度94.6％）；鹽酸文拉法辛（批號(hào)100543-201602，純度99.9％）；煙酸（批號(hào)100434-201603，純度99.8％）；那紅地那非（批號(hào)520039-201401，純度98.3％）；紅地那非（批號(hào)520047-201401，純度99.9％）；伐地那非（批號(hào)520041-201401，純度99.0％）；西地那非（批號(hào)510068-201401，純度99.9％）；豪莫西地那非（批號(hào)520046-20140l，純度99.6％）；氨基他達(dá)拉非（批號(hào)520042-201401，純度99.4％）；硫代艾地那非（批號(hào)520048-201401，純度99.5％）；偽伐地那非（批號(hào)520041-201401，純度99.0％）；那莫西地那非（批號(hào)520040-20140l，純度99.5％）；以上標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；羥基豪莫西地那非批號(hào)CDDM-H942840，純度98.8％，TRC；他達(dá)拉非批號(hào)CDFZ-T-103，純度99.6％。

1260型高效液相色譜儀：美國(guó)Agilent公司；4500型三重四極桿復(fù)合離子阱質(zhì)譜（QTRAP）儀：美國(guó)SCIEX公司；XS205DU型電子分析天平：梅特勒-托利多儀器；SB-5200DT型超聲波清洗機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司；Milli-Q型超純水系統(tǒng)：美國(guó)Millipore公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1溶液制備

1.2.1.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制：將30種違禁添加藥物分別稱取約10mg，置于10mL容量瓶中，11種那非類標(biāo)準(zhǔn)品中加入一定量的乙腈超聲溶解后定容，其余標(biāo)準(zhǔn)品加入一定量甲醇超聲溶解后定容，均配制成濃度約為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，并保存于-4℃冰箱中。
混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制：分別精確吸取30種標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液適黃于一個(gè)100mL容量瓶中，用甲醇稀釋混勻后定容。使?jié)舛葹?～10μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，待使用時(shí)進(jìn)一步稀釋。

1.2.1.2供試品溶液的制備

將片劑、顆粒劑和膠囊（內(nèi)容物）樣品細(xì)致研磨，得到均質(zhì)樣品后稱量，稱取0.1000g左右樣品于100mL容量瓶中，加入甲醇適量，超聲提取30min，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，靜置，取上清液經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，取濾液待測(cè)。若陽(yáng)性樣品濃度超出線性范圍則用甲醇按一定比例稀釋后再測(cè)。

1.2.2高效液相色譜條件

色譜柱：PhenomenexKjneLex-C₁₈色譜柱，規(guī)格50mm×2.1mm，2.6μm；柱溫：40℃；流動(dòng)相：A為乙腈，B為10mmol/L乙酸銨水溶液；梯度洗脫：0～7min，10％A～90％A，7～8min，90％A，8～8.1min，90％A～10％A，8.1～10min，10％A；流速：250μL/min；進(jìn)樣量：1μL。

1.2.3三重四極桿質(zhì)譜參數(shù)

離子源：TurboV電噴霧離子源（ESI）；掃描模式：正、負(fù)離子同時(shí)掃描，定時(shí)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)→信息依賴性獲取→增強(qiáng)型子離子掃描（ScheduledMRM→TDA→EP）；掃描范圍：50～650Da；氣簾氣（CUR）：30psi；碰撞氣（CAD）：High；噴霧電壓（IS）：5500V/-4500V；離子源溫度：550℃；霧化氣（GASl）：55psi；輔助氣（GAS2）：55psi。經(jīng)質(zhì)潛條件優(yōu)化后，30種物質(zhì)的色譜保留時(shí)問(wèn)、分子離子對(duì)及其采集參數(shù)，詳見表1。

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