2.3.3 COS作用時(shí)間對(duì)其聯(lián)合DOX抑制MDA-MB-231細(xì)胞生存率的影響

在MDA-MB-231細(xì)胞中，進(jìn)一步分析COS作用時(shí)問(wèn)對(duì)細(xì)胞生存率的影響。由圖7所示，與初始狀態(tài)下的細(xì)胞生存率相比(見圖7(a))，COS短時(shí)間作用后細(xì)胞生存率顯著降低，表現(xiàn)出增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)DOX敏感性的能力。其中，給藥時(shí)間4h條件下(見圖7(b))，COS質(zhì)量濃度在0～125ug/mL時(shí)細(xì)胞生存率呈質(zhì)量濃度依賴性下降，250～1000μg/mL時(shí)趨于平穩(wěn)，與陽(yáng)性藥物DOX組相比均有極大的顯著性差異(***P＜O.001)：作用8h(見圖7(c))，COS質(zhì)量濃度在0～125μg/mL時(shí)細(xì)胞生存率約下降20％，與DOX組相比有較大顯著性差異(**P＜0.01)，增大質(zhì)量濃度在250～1000μg/mL時(shí)有顯著性差異(*P＜0.05)。繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)問(wèn)至12h并不能降低細(xì)胞的生存率(見圖7(d))。COS在MDA-MB-231細(xì)胞中增強(qiáng)其對(duì)阿霉素敏感性的機(jī)制有待進(jìn)一步分析。

2.4 COS聯(lián)合DOX抑制MDA-MB-231細(xì)胞生存率的機(jī)制初探

2.4.1 COS對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞遷移能力的影響

考慮到MDA-MB-231細(xì)胞的高遷移特性，首先以小室遷移實(shí)驗(yàn)體外考察COS能否抑制腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散。如圖8所示，500μg/mLCOS作用后，相較于空白對(duì)照組(NC)，COS組的細(xì)胞遷移數(shù)量明顯減少(**P＜0.01)。說(shuō)明COS可有效抑制MDA-MB-231細(xì)胞遷移，這與Nam等報(bào)道的研究現(xiàn)象一致。此外，COS抑制腫瘤細(xì)胞遷移的現(xiàn)象也存在于成纖維HTl080細(xì)胞和MCF-10A乳腺上皮細(xì)胞。由此確認(rèn)了COS抑制腫瘤細(xì)胞遷移的作用。

2.4.2 COS對(duì)DOX入核的影響

DOX作用于腫瘤細(xì)胞時(shí)，作為拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑，進(jìn)入細(xì)胞核干擾DNA復(fù)制而發(fā)揮作用。借助DOX自帶紅色熒光的特點(diǎn)，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察復(fù)合COS給藥時(shí)，MDA-MB-231細(xì)胞對(duì)DOX的攝取效果，結(jié)果如圖9所示。隨著DOX作用時(shí)問(wèn)的延長(zhǎng)，無(wú)論是否給藥COS，細(xì)胞內(nèi)DOX熒光強(qiáng)度均呈時(shí)間依賴性增強(qiáng)。進(jìn)一步與復(fù)合給藥相比，1h時(shí)，兩組都觀察到輕微的DOX入核量，且差異不明顯。而在3h時(shí)，COS與DOX復(fù)合給藥組較DOX單獨(dú)給藥組顯示出更強(qiáng)的核內(nèi)紅色熒光。5h時(shí)，兩組的細(xì)胞核內(nèi)紅色熒光均達(dá)到最強(qiáng)但元顯著差異。由此說(shuō)明，COS具有促進(jìn)DOX快速富集于MDA-MB-231細(xì)胞核的作用。推測(cè)這一過(guò)程可能與COS帶正電荷有關(guān)，由于靜電作用靶向改變了腫瘤細(xì)胞膜表面負(fù)向電子流，從而影響信號(hào)傳導(dǎo)通路。此外，COS的這種增強(qiáng)DOX誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用也在負(fù)載DOX的含COS納米材料中被發(fā)現(xiàn)和報(bào)道。

總結(jié)以上結(jié)果可以推測(cè)，在MDA-MB-231細(xì)胞中，COS與DOX的復(fù)合給藥通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞遷移，并促進(jìn)陽(yáng)性藥物DOX的入核而發(fā)揮抗腫瘤活性。二者的聯(lián)用具有一定協(xié)同增效作用。

3 結(jié)語(yǔ)

COS具有良好的生物相容性和廣泛的生物學(xué)活性。COS的抗腫瘤作用是研究的熱點(diǎn)，但其作用與機(jī)制因糖的組成以及細(xì)胞種類等而各異，有必要進(jìn)一步在特定細(xì)胞上探討COS的作用與機(jī)制。

步在特定細(xì)胞上探討COS的作用與機(jī)制?；谇捌谠诩?xì)胞水平發(fā)現(xiàn)的糖與化療藥物聯(lián)用提高藥效的研究結(jié)果，本研究中在酶法制備得到聚合度2～4的低相對(duì)分子質(zhì)量COS的基礎(chǔ)上，采用COS與DOX復(fù)合給藥的方式評(píng)價(jià)COS的抗腫瘤作用。體外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，單獨(dú)給藥低質(zhì)量濃度COS對(duì)所選用的3株腫瘤細(xì)胞并無(wú)顯著抑制效果：當(dāng)與DOX復(fù)合給藥時(shí)，低質(zhì)量濃度COS即可顯著降低人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞生存率。進(jìn)一步的機(jī)制分析推測(cè)了COS可通過(guò)抑制人乳腺癌細(xì)胞遷移，同時(shí)促進(jìn)DOX入核而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥的敏感性，發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤特性。這為功能糖等膳食補(bǔ)充劑與化療藥物聯(lián)用的治療方案提供了數(shù)據(jù)參考和理論支撐。

由于COS的抗腫瘤作用與機(jī)制較為復(fù)雜，受糖本身性質(zhì)以及細(xì)胞株影響較大，未來(lái)對(duì)于COS抗腫瘤作用的深入解析還有待從特定糖的結(jié)構(gòu)、糖與細(xì)胞作用的靶點(diǎn)、可能影響的關(guān)鍵基因和信號(hào)通路等分子水平進(jìn)一步闡釋和驗(yàn)證。

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